上一篇文章我們整理了關(guān)于高效液相色譜儀使用中常見的細節(jié)問題的一部分，事實上關(guān)于液相色譜儀在炒作過程中還有很多需要操作者米車關(guān)注的細節(jié)，比如說梯度洗脫，壓力高低，六通閥的使用等等，這些都是我們在使用高效液相色譜儀時時刻需要關(guān)注的細節(jié)，下面我們就另一部分使用細節(jié)做下簡單的闡述，希望能對大家有所幫助。

1、梯度洗脫的流動相選擇不當怎么辦？

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要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時更要引起注意。當有機溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。

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2、壓力為啥過高或過低？

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可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應(yīng)逐段進行。在進行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：

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PS：（在液相色譜中對組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個分析周期中，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。

梯度洗脫的優(yōu)點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。）

高效液相色譜儀——色譜柱

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3、關(guān)于六通閥的正確使用和維護：

①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。

②轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的zui大壓力；再轉(zhuǎn)到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。

③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。

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4、梯度洗脫過程中壓力?

混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的zui大壓力。

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5、空白梯度洗脫要注意什么？

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梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫，以辨認溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時產(chǎn)生氣泡。

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